Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的现实生活中逐渐扩展

从第一次用到胰脏自身突变到用到1改进型哮喘医学病征的重大突破率在老年人末期就有比较好的说明了，多个胰脏自身突变感染性的老年人中的有70%在血清转换后10天内患上哮喘，而随访15年的老年人这一比例减低到84%。比起之下，占医学1改进型哮喘一半以上的改进型1改进型哮喘的患病机制还并未得不到充份的深入研究。

越来越多的人开始运用于分期管理系统来判别1改进型哮喘的重大突破：个纤在用到多种胰脏自身突变时转至第1阶段性，用到血糖异常时转至第2阶段性，用到病征时转至第3阶段性。一些多发胰脏自身突变感染性的个纤，在1期和2期，重大突破极快，并转变为患病的1改进型哮喘。我们前说明了了三组成员在首次验证到多种胰脏自身突变抽样后数10年无哮喘的更太快重大突破者，这组成员病变人数寡，但形态极其明确。随后，我们发现胰脏自身淋巴细胞抗体CD8+T新线粒纤加成在重大突破加速的病变中的基本不假定，但在现阶段患病和依然假定的哮喘病变中的很更易验证到。这或许指出，与重大突破病变比起，这些病变自身免疫加成的调节增强。

中期深入研究指出，尽管调节性T新线粒纤(Treg)数量正常，但哮喘病变假定一些功能缺失，其中的包含对IL-2的加成能力降低。此外，哮喘病变中的的现像CD4+T新线粒纤或许对调节更具抵抗性，发挥为现像T新线粒纤的可抑制向西移动，自然环境转化成的Treg和纤外转化成的可借Treg，以及淋巴细胞历程的CD4+T新线粒纤中的IL-2加成向西移动。本深入研究的目的是说明了了CD4+调节性T新线粒纤(Treg)在一小群极加速重大突破者中的的形态，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以年轻人进一步将的侧向深入研究，在21岁以下确诊的病变亲属中的体检1改进型哮喘的可怕因素。我们前说明了了依然加速重大突破者的形态，他们保持多重胰脏自身突变感染性大约10年，但并未用到哮喘的医学病征，太快性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续保持无哮喘并乐意提供大量尿液抽样的加速重大突破者纳入T和B新线粒纤功能归纳。在目前的深入研究中的，8名太快重大突破者(SP组成员)，中的位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的胰脏自身突变感染性。所有的自发性都西北面1改进型哮喘重大突破的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身突变对某些淋巴细胞的感染性加成，然而，一名病变早已西北面2期数6年，但并未用到医学病征，一名病变被诊断为哮喘，该成年人72岁，在通过观察实验抽样时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中的对该供纤同步进行了实质上分析。转化外周血单个核加成新线粒纤(PBMCs)，选用多参数流式新线粒纤练成和T新线粒纤可抑制试验分析供纤中的Treg的频谱、表改进型和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、连续性和紧接)同步进行无监督聚类归纳，分析Treg表改进型。

结果：与生活品质供纤比起，来自太快重大突破纤的失忆CD4+T新线粒纤的监督聚类显示，依赖性的失忆CD4+ Treg频谱减低，与组胺可借的TNFR就其蛋白(GITR)解读减低有关。一名HbA1c消退的病变与重大突破加速者和也就是说的极其寡比起，Treg谱有所不尽相同。功能归纳指出，与生活品质供纤比起，来自加速重大突破纤的Treg依赖性的CD4+现像T新线粒纤可抑制明显受到影响。发挥为对现像CD4+T新线粒纤CD25和CD134解读的可抑制减低。

示意图1 深入的表改进型归纳显示，CD4+Treg亚改进型在太快重大突破说明了符中的减低。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有供纤的活CD4+CD45RA -新线粒纤上。根据标明物解读鉴定单单10个元簇:失忆T新线粒纤_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T新线粒纤;HLA-DR + GITR +失忆T新线粒纤;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)运用于9个不尽相同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个结点代表一个战略性(100个战略性)，很大的元战略性(10个元战略性)在结点组成员周围上色。每个结点中的的饼示意图问到单个标明的解读级别。(b)每个元聚类的热示意图，以显示整纤标明解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的很薄。(e-l)相对于轻元素为每个metacluster盒新线示意图(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T新线粒纤(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T新线粒纤(l)。橙色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon三组成员标记秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 运用于CITRUS的预测模改进型推测，Treg频谱的减低是重大突破加速的标记。分级依赖型(a - f)和柑橘归纳(g-k)相当SP自发性和也就是说的HD自发性在CD4+CD45RA−T新线粒纤上的关联性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的特色示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读同步进行转化，各种类型FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(布氏)组成员以及供纤SP 606(橙色)中的CD25+ cd127的频谱摘要示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型弟集的盒新线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读其中心着色，交叉厚实的簇被识别为SP和HD说明了符彼此之间的不尽相同。(j)盒新线示意图显示了在SP(布氏)和HD(灰点)组成员中的，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相对于轻元素(比例)。(k)直方示意图显示每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标明相对于解读与时代背景解读(粉红色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。时代背景与所有其他簇中的标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon三组成员标记秩检验

示意图3 与生活品质献血者比起，重大突破加速者失忆treg的GITR减低。每个失忆CD4+T新线粒纤元簇(失忆T新线粒纤_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T新线粒纤;HLA-DR + GITR +失忆T新线粒纤;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个解读标明的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)说明了符的解读热示意图(sp606不包含在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR解读串联，显示直方示意图(c)和摘要示意图(d)。Wilcoxon三组成员标记秩和检验，p< 0.07(橙色)所有供纤包含，p< 0.05(粉红色)供纤SP 606和也就是说的HD不包含在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR解读，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橙色)串联，显示直方示意图(e)和摘要示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon三组成员标记秩检验

示意图4 来自加速重大突破的CD4+ treg新线粒纤支配现像CD4+T新线粒纤的能力降低。SP组成员用粉红色的新线和白点问到，HD组成员用蓝色的新线和白点问到，橙色的新线/白点问到供纤sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T新线粒纤同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标明为CFSE, Treg按观察的比例溶液。用抗CD3 /28微珠增殖新线粒纤，培训3天后同步进行流式新线粒纤练成验证。(a-d)与CD4+转发者相对于理应的treg培训(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比率。运用于感染性折衷(依赖性的拥护新线粒纤仅有treg)计算可抑制比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

示意图5 现像CD4+T新线粒纤对加速重大突破的T新线粒纤增殖的可抑制更敏感。SP组成员用粉红色的新线和白点问到，HD组成员用蓝色的新线和白点问到，橙色的新线/白点问到供纤sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T新线粒纤同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标明，treg按观察的比例溶液。用抗CD3 /28微珠增殖新线粒纤，培训3天后同步进行流式新线粒纤练成(CD25反染)和新线粒纤因弟归纳。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制三份(b)。(c,d) CD25可抑制三份(c)和CD134可抑制三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中的的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

论点：我们得单单的论点是，来自加速重大突破弟的增殖失忆CD4+Treg在GITR解读中的得不到了引入和丰富，忽视了进一步深入研究Treg在1改进型哮喘风险个纤中的的关联性性的重要性。

原文单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28